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葡聚糖凝膠柱

更新時(shí)間：2011-03-09 | 點(diǎn)擊率：2062

（1）預(yù)處理
稱(chēng)取葡聚糖凝膠（有不同型號(hào)）若干克，加入洗脫劑（通常為甲醇或者水，這里以甲醇為例）約20倍凝膠量，置室溫下3h進(jìn)行溶脹，溶脹必須*，否則會(huì)使上柱后流速變慢，凝膠斷裂等。
（2）裝柱
凝膠層析柱的直徑與柱長(zhǎng)之比一般為1:15。柱的底部用裝有細(xì)玻璃管的橡皮塞塞緊，用洗凈的玻璃絲（約200目尼龍布）墊底或購(gòu)買(mǎi)類(lèi)似規(guī)格的商品柱。然后將柱垂直安裝好，接著將溶脹好的凝膠邊攪勻邊緩緩連續(xù)裝入，色譜柱的出口流速m維持在5~10ml/min。凝膠顆粒沉積到柱底后關(guān)緊色譜柱，等沉降到1-2cm時(shí)再2打開(kāi)色譜柱。直至降到滿(mǎn)意高度為止，等凝膠柱內(nèi)的液體留的與凝膠高度差不多時(shí)，用較小的濾紙蓋住凝膠床表面，再用洗脫劑洗脫過(guò)夜。裝柱后的凝膠必須均勻，不能有氣泡或明顯條紋。否則，必須到出重裝。
（3）加樣
裝好的色譜柱至少要用相當(dāng)于3倍保留體積的洗脫劑平衡，待洗脫劑流至與凝膠柱液面相平時(shí)（不能流干，否則會(huì)帶入氣泡），用滴管吸取樣品溶液，在高于凝膠表面約1cm處，沿管壁四周緩緩滴加樣品液，加完后打開(kāi)下面的出口，使樣品滲入凝膠內(nèi)。再關(guān)閉出口，用少量洗脫液將管壁殘留的樣品洗下，再打開(kāi)出口，至溶液滲入柱內(nèi)，再關(guān)閉出口。可以考慮再加一層薄薄的脫脂棉以保護(hù)柱表面（我一般不加），然后即可進(jìn)行洗脫。
（4）洗脫與收集
洗脫時(shí)，用甲醇作洗脫劑，并且要連續(xù)不斷地進(jìn)行，使凝膠柱上端保持一定的液層，防止凝膠柱表面的液體流干。一般酸性洗脫劑中堿性物質(zhì)容易洗脫，堿性洗脫劑中酸性物質(zhì)容易洗脫。多糖類(lèi)物質(zhì)等極性大的物質(zhì)考慮用水洗脫，常用的洗脫劑是水-甲醇，水-乙醇，水-丙酮等，一般根據(jù)自己樣品的性質(zhì)選擇洗脫液，洗脫液可一直用單一梯度。凝膠色譜的共性是流速慢，每份一般體積較小。（內(nèi)徑1.3cm左右，長(zhǎng)80cm左右的柱子我一般每份收集液為8ml）
（5）凝膠的再生和回收
凝膠柱多次使用后，若污染嚴(yán)重，則考慮用50度左右的2%的NaOH和0.5mol/LNaCl混合液浸泡后，再用水洗凈即可。
通常層析柱經(jīng)洗脫劑再生、平衡后，就可反復(fù)使用。但使用過(guò)多次后凝膠床體積變小，流速降低，凝膠污染雜質(zhì)過(guò)多，甚至變色，需經(jīng)再生后才可使用。再生方法有多種：如（1）用水進(jìn)行逆向沖洗，再用洗脫劑平衡，便可重新使用。又如（2）把凝膠倒出，用6mol/L脲浸泡凝膠半小時(shí)，抽濾，再用水漂洗數(shù)次，除凈脲，必要時(shí)重復(fù)上述操作即可重新使用。

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